LAPORAN PRAKTIKUM
KULTUR JARINGAN
Disusun Oleh :
NAMA : RIRIN TRISNAWATI
NIM : H 3505025
KELOMPOK : 8
LAB FISIOLOGI DAN BIOTEKNOLOGI
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA
2008
HALAMAN PENGESAHAN
Laporan praktikum Kultur Jaringan ini disusun guna melengkapi tugas mata kuliah Kultur Jaringan yang telah diketahui serta disahkan oleh asisten dan dosen Kultur Jaringan pada tanggal: Januari 2008.
Disusun oleh:
Nama : Ririn Trisnawati
Nim : H3505025
Kelompok : 8
Mengetahui.
Dosen Kultur Jaringan Co- assisten
Ir.Praswanto,MP Candra Wijaya
NIP: NIM: H 0103010
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat, taufiq da hidayahnya kepada penulis, sehingga dapat menyelesaikan laporan praktikum Kultur Jaringan ini.
Laporan ini disusun sebagai rangkaian praktikum mata kuliah Kultur Jaringan. Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Dekan Fakultas Pertanian UNS Surakarta.
2. Tim dosen pengampu mata kuliah Kultur Jaringan yang telah banyak membantu dan membimbing dalam kegiatan praktikum.
3. Co-assisten yang telah banyak membantu dan membimbing dalam kegiatan praktikum.
4. Ayah dan Ibunda tersayang yang sangat mendukung penuh dalam kegiatan praktikum ini.
5. Teman-teman Agrofarmaka 2005 yang telah membantu dan mensuport pembuatan laporan ini, yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
6. Semua pihak yang telah banyak membantu dalam penyusunan laporan ini.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam penulisan laporan ini masih banyak kekurangan dan kekeliruan, maka dari itu penulis sangat mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun yang dapat membantu demi lengkapnya laporan ini. Penulis juga berharap laporan ini dapat bermanfaat bagi penulis khususnya dan pada pembaca pada umumnya.
Surakarta, Januari 2008
Penulis
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i
HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... ii
KATA PENGANTAR ...................................................................................... iii
DAFTAR ISI .................................................................................................... iv
DAFTAR TABEL ............................................................................................. vi
I. STERILISASI ALAT DAN PEMBUATAN MEDIA KULTUR
JARINGAN............................................................................................... 1
A. Pendahuluan ....................................................................................... 1
1. Latar Belakang ............................................................................. 1
2. Tujuan Praktikum ......................................................................... 2
3. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 2
B. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 2
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja ................................................................. 3
1. Alat…………………………………………………………….. 3
2. Bahan .......................................................................................... 4
3. Cara Kerja ................................................................................... 4
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................. 6
II. KULTUR JARINGAN MAWAR............................................................. 7
A. Pendahuluan ........................................................................................ 7
1. Latar Belakang ............................................................................... 7
2. Tujuan Praktikum ........................................................................... 8
3. Waktu dan Tempat Praktikum ........................................................ 8
B. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 8
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja ................................................................. 9
1. Alat…………………………………………………………….. 9
2. Bahan ……………………………………………………….. ... 9
4. Cara Kerja ................................................................................... 9
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan ..................................................... 11
E. Kesimpulan dan Saran ........................................................................ 12
1. Kesimpulan .................................................................................... 12
2. Saran.............................................................................................. 13
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................. 14
III. KULTUR JARINGAN MELATI............................................................ 15
A. Pendahuluan ........................................................................................ 15
1. Latar Belakang ............................................................................... 15
2. Tujuan Praktikum ........................................................................... 15
3. Waktu dan Tempat Praktikum ........................................................ 16
B. Tinjauan Pustaka ................................................................................ 16
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja ................................................................. 17
1. Alat…………………………………………………………….. 17
2. Bahan ………………………………………………………….. 17
3. Cara Kerja ……………………………………………………… 17
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan ..................................................... 18
E. Kesimpulan dan Saran ........................................................................ 20
1. Kesimpulan .................................................................................... 20
2. Saran.............................................................................................. 21
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................. 22
IV. KULTUR JARINGAN ANGGUR........................................................... 23
A. Pendahuluan ........................................................................................ 23
1. Latar Belakang ……………………………………………….… 23
2. Tujuan Praktikum ………………………………………………. 24
3. Waktu dan Tempat Praktikum …………………………………. 24
B. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 24
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja ................................................................. 25
1. Alat ………………………………………………………….. . 25
2. Bahan ………………………………………………………… 25
3. Cara Kerja …………………………………………………….. 26
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan ..................................................... . 27
E. Kesimpulan dan Saran ........................................................................ . 28
1. Kesimpulan .................................................................................... 28
2. Saran.............................................................................................. 29
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................. 30
V. KULTUR JARINGAN WORTEL............................................................ 31
A. Pendahuluan ........................................................................................ 31
1. Latar Belakang ............................................................................. 31
2. Tujuan Praktikum ......................................................................... 31
3. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 32
B. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 32
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja ................................................................. 33
1. Alat…………………………………………………………….. 33
2. Bahan ………………………………………………………….. 33
3. Cara Kerja ................................................................................... 33
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan ..................................................... 34
E. Kesimpulan dan Saran......................................................................... 36
1. Kesimpulan .................................................................................... 36
2. Saran.............................................................................................. 36
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................. 37
LAMPIRAN
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Saat Muncul Tunas Tanaman Mawar ................................................. i
Tabel 4.1 Saat Muncul Kalus Tanaman Anggur.................................................. ii
BAB I
STERILISASI ALAT DAN PEMBUATAN MEDIA KULTUR
A. Pendahuluan
1. Latar Belakang
Kultur jaringan tanaman merupakan salah satu aplikasi dari bioteknologi tanaman yang merupakan budidaya tanaman yang dikerjakan secara in-vitro (dalam wadah tertutup atau dalam botol). Kultur jaringan dalam bahasa asing disebut sebagai tissue culture, weefsel cultures atau gewebe kultur.
Kultur jaringan didefinisikan sebagai suatu teknik menumbuhkembangkan bagian tanaman baik berupa sel, jaringan atau organ dalam kondisi aseptik secara in-vitro, yang dicirikan kondisi kultur yang aseptic, penggunaan media kultur buatan dengan kandungan nutrisi lengkap dan ZPT (Zat Pengatur Tumbuh) serta kondisi ruang kultur yang suhu dan pencahayaannya terkontrol.
Sterilisasi dan pembuatan media kultur menjadi alternative pilihan pertama untuk melaksanakan kultur jaringan. Pada saat ini teknik kultur jaringan telah banyak dimanfaatkan dalam usaha pelestarian plasma nutfah tanaman. Keutungan yang dapat diambil dari penggunaan kultur jaringan untuk pelestarian tanaman antara lain efisiensi untuk tanman yang tidak berbiji atau tanaman berbiji rekalsitran, tidak memerlukan ruang atau lahan yang luas, resiko kegagalan karena iklim atau penyakit dapat dihindari, memungkinkan dilakukannya manipulasi genetic dan bibit yang dihasilkan lebih sehat
Prospek kultur jaringan pada masa sekarang cukup menjanjikan menyangkut peningkatan hasil produksi serta peningkatan mutu dan kualitas produksi bibit yang dihasilkan.
2. Tujuan
§ Mengetahui prosedur sterilisasi alat-alat penanaman.
§ Mengetahui langkah-langkah dalm pembuatan media kultur jaringan.
3. Waktu dan Tempat Praktikum
Praktikum sterilisasi alat dan pembuatan media kultur ini dilaksanakan pada hari Rabu tanggal 28 November 2007, di Laboratorium Fisiologi Tanaman dan Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Tinjauan Pustaka
Teknik Kultur Jaringan adalah mengisolasi bagian tanaman ( sel, jaringan, organ ) seperti daun mata tunas serta menumbuhkan bagian-bagian tersebut dalam media buatan secara aseptic yang kaya nutrisi lengkap dan zat pengatur tumbuh dalam wadah tertutup yang tembus cahaya sehingga bagian tanaman dapat memperbanyak diri dan bergenerasi menjadi tanaman lengkap ( Husni, A.1997 )
Teknik ini dicirikan oleh kondisi aseptic, penggunaan media kultur buatan dengan kandungan nutrisi lengkap dan ZPT ( zat pengatur tumbuh ), serta kondisi ruang kultur yang suhu dan pencahayaannya terkendali. Kultur jaringan merupakan salah satu aplikasi dari bioteknologi tanaman yang dikerjakan secara in vitro ( Martin, 1994 )
Zat pengatur tumbuh pada tanaman adalah senyawa organic yang bukan hara, yang dalam jumlah sedikit dapat mendukung, menghambat dan merubah proses fisiologis tumbuhan.Zat pengatur tumbuh hanya diperlukan dalam jumlah sedikit sekali ( Abidin, 1999 )
Dalam kultur jaringan terdapat beberapa aspek yang berpengaruh terhadap keberhasilan perbanyakan tanaman antara lain keseimbangan zat pengaturan zat pengatur tumbuh yang terkandung dalam media menentukan arah suatu kultur. Auksin dan sitokinin merupakan zat pengatur tumbuh yng sering digunakan dalam kultur jaringan. Sitokinin dan auksin dalam keseimbangan yang tepat berpengaruh terhadap proses organogenesis (Winarsih, dan Priyono, 2000).
Komponen media kultur yang lengkap sebagai berikut:
§ Air destilasi (aquadest) atau air bebas ion sebagai pelarut atau solven.
§ Hara-hara makro dan mikro.
§ Gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber eneergi.
§ Vitamin, asam amino dan bahan organic lain.
§ Zat pengatur tumbuh.
§ Suplemen berupa bahan-bahn alami, jika diperlukan.
§ Agar-agar atau gelrite sebagai pemadat media (Yusnita,2004 ).
Pembuatan media tumbuh yang terdiri atas campuran garam mineral berisi unsure makro dan unsure mikro, asam amino, vitamin, gula serta hormone tumbuhan dengan perbandingan tertentu. Untuk membuat media cair bahan-bahan dicampur air suling, sedang untuk membuat media padat, bahan-bahan dicampur dengan agar-agar. Media yang sudah dibuat lalu disterilkandalam autoklaf kemudian media ditempatkan dalam botol erlenmeyer (Butcher dan street, 1964).
Autoklaf merupakan sebuah bejana yang dapat diisi air dan ditutup rapat-rapat. Kalau air dipanaskan, uap yang terjadi tidak dapat keluar, sehingga tekanan dalam autoklaf naik sampai lebih tinggi daripada tekanan normal. Pertambahan tekanan menyebabkan air mendidih diatas titik didih normal. Kalau dalam keadaan biasa air mendidih pada suhu 100°C (Narayaswami dan Norstog, 1964).
Sterilitas dengan autoklaf adalah suatu metode sterilitasasi dengan uap air dibawah tekanan. Kapas penyumbat, kasa, peralatan laboratorium, plastic penutup, peralatan gelas, penyaring, pipet, air, dan media nutrisi dapat disterilisasi dengan autoklaf. Hampir semua mikroba mati apabila terkena uap air yang sangat panas dari autolaf selama 10-15 menit. Semua obyek hendaknya disterilisasi pada suhu 121o C dan takanan 15 Psi selama 15-20 menit (Teres, 1989).
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja
1. Alat
a. Peralatan untuk penanaman eksplan
· Laminar Air Flow Cabinet (LAFC)
· Petridish dan botol-botol kultur
· Peralatan direksi, seperti :pinset, pisau pemes, gunting
Alat-alat penanaman, yaitu petridish dan peralatan diseksi dibungkus dengan kertas, kemudian disterilisasi di dalam autoklaf pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit. Setelah disterilisasi, alat-alat tersebut disimpan di dalam oven
b. Peralatan untuk pembuatan media
· Timbangan analitik
· Botol-botol kultur
· pH meter
· gelas piala
· pipet
· plastic pp 0,3 mm
· karet gelang
· kertas label
2. Bahan
· Aquadest
· Larutan stok
· Agar-agar
· Gula
· NaOH 1 N dan HCl 1 N
3. Cara Kerja
a. Pembuatan Larutan Stok
1) Larutan Stok Media
· Menimbang bahan – bahan kimia yang telah dikalikan menjadi beberapa kali konsentrasi
· Melarutkan bahan-bahan kimiatersebut kedalam aquades dengan volume tertentu
· Memasukkan masing-masing larutan kedalam btol dan menyimpannya ke dalam refigenerator
2) Larutan Stok Zat Pengatur Tumbuh
· Menghiutung kebutuhan bahan BAP 100 pmm sebanyak 300 ml adalah sebagai berikut: 100 ppm = 100 mg/l, >30 mg/300 l
· Menghiutung kebutuhan bahan paclobutrazol 100 pmm sebanyak 100 ml adalah sebagai berikut: 100 ppm = 100mg/l, >10mg/100 l
· Melarutkan bahan dengan alcohol atau NaOH 1 N kemudian ditambah dengan aquadest sampai 300ml untuk BAP dan 100 ml untuk paclobutrazol
· Memasukkkan masing-masing larutan tersebut kedalam botol dan menyimpannyaa ke dalam refigenerator
b. Pembuatan Media
Ø Mengambil masing-masing larutan stok sesuai dengan ukuran yang telah ditentukan yaitu:
o NaEDTA FeSO4 = 50 ml / L didapat dari : 10 L / 500 ml = 500 : 10 = 50 ml
o Makro = 50 ml / L didapat dari : 10 L / 500 ml = 500 : 10 = 50 ml
o Mikro = 5 ml / L didapat dari :100 L / 500 ml = 500 : 100 = 5 ml
o Vitamin = 25 ml / L didapat dari : 10 L / 250 ml = 250 : 10 = 20 ml
Ø Mengambil larutan stok ZPT sesuai dengan perlakuan yaitu ZPT :
o Paklobutrazol = 5 ml / L
o BAP = 20 ml / L
Konsentrasi keduanya 100 ppm
Adapun perhitungannya adalah :
§ BAP
V1 x M1 = V2 X M2
V1 x 100 = 1000 x 2
V1 = 20 ml / L
§ Paklobutrazol
V1 x M1 = V2 x M2
V1 x 100 = 1000 x 0,5
V1 = 5 ml / L
Keterangan :
V1 = volume larutan stok yang diambil
M1 = dosis larutan stok yang tersedia
V2 = volume media yang akan dibuat
M2 = dosis media yang akan dibuat
Ø Memasukkan larutan stok kedalam labu takar kemudian menambahkan aquadest sampai 1000 ml / sampai tanda ( pengenceran larutan stok )
Ø Memasukkan larutan kedalam beker glas.
Ø Menambah gula sebanyak 30 gr
Ø Mengatur pH dengan kisaran 5,8-6,3 dengan menambahkan beberapa tetes NaOH untuk menaikkan pH atau HCl untuk menurunkan pH
Ø Menambah agar-agar 8 gr kemudian dididihkan
Ø Menuangkan larutan media ke dalam botol-botol kultur kurang lebih 25 ml tiap botol
Ø Menutup botol berisi larutan media dengan plastic
Ø Memasukkan botol-botol berisi media kedalam autoklaf untuk proses sterilisasi pada tekanan 1,5 kg/cm3 selama 45 menit
Ø Menyimpan media pada rak penyimpan media yang bertujuan untuk mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat penanaman.
c. Media Penanaman
Dalam praktikum ini, media yang digunakan adalah media Murashige dan Skoog (MS) yang dimodifikasi dengan penambahan ZPT BAP 2 ppm dan Paclobutrazol 0,5 ppm. Media kultur tersebut digunakan untuk penanaman 4 macam eksplan dengan masing-masing eksplan diulang sebanyak 2 kali untuk setiap mahasiswa (praktikan).
DAFTAR PUSTAKA
Abidin, Z. 1999. Zat Pengatur Tumbuh. WWW. Google. co. id. 9 Januari 2008.
Butcher, D.M and H.E. Street. 1964. Excised Root Culture. The Botanical Review, No. 4 : 513-586.
Husni, A. 1997. Perbanyakan dan Penyimpangan Tanaman Melalui Kultur Jaringan. Buletin Plasma Nutfah. Vol. II (1 ) : 9-13
Martin, B. M. 1994. Tissue Culture Techniques : an introduction. Birkhauser. Boston.
Narayaswami dan Norstog. 1964. Horticultural Tecniques. Storstoch. California.
Terres, K. C. 1989. Tissue Culture Techniques For Horticultural crops. Van Nostrand Relohoid. New York.
Winarsih, S. dan Priyono. 2000. Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Pembentukan dan Pengakaran Tunas Mikro Pada Asperagus Secara In Vitro. Jurnal Hortikultura. Vol 10 (1): 11-17.
Yusnita. 2004. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman secara Efisien. Agromedia Pustaka. Jakarta.
II. KULTUR JARINGAN MAWAR
A. Pendahuluan
- Latar Belakang
Mawar merupakan tanaman bunga yang banyak diminati dan sangat familiar sekali dalam bidang hortikultura. Disetiap toko bunga, mawar selalu ada dan selalu tersedia. Mawar mempunyai prospek sangat baik sekali sebagai usaha agribisnis, karena mawar banyak disukai oleh masyarakat.
Manusia selalu mencari metode yang tepat untuk dapat menyediakan komoditas-komoditas yang dibutuhkan secara kontinue. Metode kultur invitro merupakan metode yang menguntungkan dan praktis untuk dapat dikembangkan.
Salah satu usaha dalam menyediakan bibit mawar yang tahan penyakit dengan menerapkan teknologi yang tepat guna yaitu dengan cara teknik kultur jaringan dengan memanfaatkan batang dari tanaman mawar sebagai eksplannya. Dengan teknik tersebut dapat menciptakan bibit yang tahan penyakit dan dapat menyediakan bibit dalam jumlah yang banyak dalam waktu yang relatif singkat..
Kultur jaringan tanaman akan berhasil dengan baik apabila syarat-syarat yang dibutuhkan dapat terpenuhi. Syarat-syarat tersebut meliputi : pemilihan eksplan atau bahan tanaman, penggunaan media yang sesuai, keadaan yang aseptik dan pengaturan lingkungan tempat tumbuh yang sesuai.
- Tujuan
Praktikum acara II ini bertujuan untuk:
a. Mengetahui teknik kultur jaringan mawar.
b. Mengetahui pengaruh BAP dan Paclobutrazol terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan mawar.
- Waktu dan Tempat Praktikum
Praktikum acara II ini dilaksanakan pada hari Rabu 5 Desember 2007 pukul 09.00 WIB sampai selesai bertempat di Laboratorium Fisiologi Tanaman dan Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Tinjauan Pustaka
Kultur jaringan dikembangkan sebagai salah satu metode untuk menghilangkan virus. Selain itu, metode ini juga dapat dipakai untuk perbanyakan cepat tanam bebas virus atau penyimpanan genetic. Menurut Gunawan ( !995 ), dalam kultur jaringan terdapat beberapa aspek yang berpengaruh terhadap keberhasilan perbanyakan tanaman, antara lain keseimbangan zat pengatur tumbuh yang terkandung dalam media. Keseimbangan zat pengatur tumbuh yang terkandung dalam media menentukan arah suatu kultur.
Empat kelas zat pengatur tumbuh ( ZPT ) penting dalam kultur jaringan tanaman adalah auksin, sitokinin, giberelin dan asam absisat. Perbandingan antara sitokinin dan auksin menentukan tipe organogenesis dalam kultur jaringan. Keduanya baik sitokinin atau auksin biasanya digunakan untuk mendapatkan morfogenesis, meskipun rasio untuk mendaparkan akar atau tunas tidak selalu sama baik antar spesies atau genus ( Wardiati, 1998 )
Golongan sitokinin yang sering ditambahkan dalam media antara lain adalah BAP. BAP merupakan golongan sitokinin aktifyang bila diberikan pada tunas pucuk akan mendorong proliferasi tunas yaitu keluarnya tunas lebih dari satu ( Wilkins, 1989 )
Media yang digunakan dalam kultur jaringan mawar mempunyai komposisi media yang berbeda jenis bahan kimia atau konsentrasinya. Perbedaan komposisi media dapat mengakibatkan perbedaan pertumbuhan dan perkembangan mawar yang ditumbuhkan secara invitro. Media Murashige dan Skoog (MS) sering digunakan karena cukup memenuhi unsur hara mikro, makro dan vitamin untuk pertumbuhan tanaman (Marlina, 2004).
Kultur jaringan memerlukan kecermatan tinggi dan keadaan serba suci hama. Baik tempat kerja, alat-alat dan bahan, serta tenaga orang yang mengerjakannya harus steril. Untuk membuat suci hama harus dipakai pemanasan dalam autoklaf, desinfektan atau lampu ultraviolet. Dengan autoklaf, desinfektan atau lampu ultraviolet, mikroba-mikroba pengganggu dapat dimatikan. Kultur yang sudah tercemar bakteri atau jamur tidak dapat dipertahankan sehingga harus dibuang. Pencemaran jamur atau bakteri akan nampak beberapa hari setelah tanam berupa koloni jamur atau bakteri dipermukaan media agar-agar atau keruhnya media cair (Rahardja, 1988).
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja
- Alat
a. LAFC lengkap dengan lampu bunsen
b. Petridish dan botol-botol kultur
c. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau pemes
- Bahan
a. Eksplan : Mawar
b. Media Kultur
c. Alkohol 96%
d. Aquadest steril
e. Spirtus
f. Chlorox (sunclin)
- Cara Kerja
a. Mempersiapkan eksplan
b. Mensterilisasi eksplan (dilakukan dalam LAFC)
· Merendam eksplan dalam larutan Dithane M-45 3 mg/l selama ± 12 jam, dilanjutkan dengan chlorox 5, 25% (sunclin 100%) selama ± 3 menit.
· Membilas eksplan dengan aquadest steril.
c. Menanam eksplan
· Membuka plastik penutup botol media kultur.
· Mengambil eksplan dan menanamnya di media kultur dengan pinset. Setelah digunakan, pinset harus selalu dibakar di atas api.
· Selama penanaman, mulut botol harus selalu dekat dengan api untuk menghindari kontaminasi.
d. Memelihara eksplan
· Menempatkan botol-botol media berisi eksplan pada rak-rak kultur.
· Menjaga Suhu, kelembaban dan pencahayaan lingkungan di luar botol.
· Menyemprot botol-botol kultur dengan spirtus setiap 2 hari sekali untuk mencegah kontaminasi.
e. Melakukan pengamatan selama 5 minggu, meliputi:
· Saat muncul akar, tunas, daun dan kalus (HST), diamati setiap hari.
· Jumlah akar, tunas dan daun, diamati 1 minggu sekali.
· Deskripsi kalus (struktur dan warna kalus), dilakukan pada akhir pengamatan.
· Persentase keberhasilan, dilakukan pada akhir pengamatan.
D. Hasil dan Pembahasan
1. Hasil pengamatan
Tabel 2.1 Saat Muncul Tunas Tanaman Mawar
| Macam Eksplan | Ulangan | Saat Muncul Tunas |
| Mawar | 1 | 24 HST |
| 2 | Kontaminasi | |
| 3 | Kontaminasi | |
| 4 | Kontaminasi | |
| 5 | _ | |
| 6 | Kontaminasi |
Sumber: Data Rekap
2. Analisis Hasil Pengamatan
Perhitugan Persentase Keberhasilan :
Eksplan mawar yang masih hidup = 2
Persentase Keberhasilannya = 
=33.3 %
3. Pemmbahasan
Kultur jaringan mawar pada acara II ini dilakukan dengan langkah – langkah yang pertama meliputi persiapan eksplan. Persiapan eksplan dilakukan dengan inisiasi yang merupakan pengambilan eksplan dari bagian tanaman yang akan di kulturkan. Dalam acara ini tentunya dari tanaman mawar, sedangkan untuk spesifiknya mawar jenis ap, kurang begitu diketahui. Adapun bagian tanaman yang di ambil untuk eksplan adalah bagian batang meristemnya,sehingga dapat dikatakan juga pada acara ini melakukan kultur meristem yang biasa digunakan untuk menghasilkan tanaman bebas virus.
Kedua, dilakukan sterilisasi eksplan yang merupakan usaha untuk membebaskan eksplan dari mikroba yang menginfeksinya. Hal tersebut dilakukan dengan cara perendaman eksplan kedalam larutan dithane M – 45 3 mg / L selama kurang lebih 12 jam, dilanjutkan dengan direndam dalam chlorox 5,25 % selama kurang lebih 3 menit dan kemudian membilas eksplan dengan aquades steril.
Ketiga penanaman eksplan, Eksplan yang telah disiapkan dan telah disterilisasi siap untuk ditanam. Penanamannya menggunakan media yang telah dibuat pada acara I. Ketentuan lebih jelasnya telah terdapat pada cara kerja. Penanaman eksplan diulang sebanyak dua kali untuk setiap praktikan, Berhubung kelompok kami ( kelompok 8 ) terdiri dari 3 orang maka jumlah eksplan yang di tanam adalah 6 buah.
Setelah penanaman, hal terpenting adalah pemeliharaan. Botol – botol kultur berisi media eksplan dipelihara dalam ruang kultur aseptic ( steril ) dengan suhu, kelembaban, dan pencahayaan yang tepat. Pemeliharaan juga meliputi penyemprotan botol – botol kultur dengan spirtus yang dilakukan tiap 2 hari sekali untuk mencegah kontaminasi. Tapi pada kenyataannya, penyemprotan botol – botol kultur pada kelompok kami kurang teratur. Hal ini dikarenakan jatuhnya hari penyemprotan terkadang bertepatan dengan hari libur dan bertepatan dengan hari saat tidak ke kampus, lupa, atau bahkan kelebihan penyemprotan (double penyemprotan dalam 1 hari ) karna kurang ter koordinasinya praktikan.
Terakhir tentunya adalah kegiatan mengamati. Pengamatan dimulai dari 1 HST ( hari setelah tanam ) sampai 34 HST. Pada tanggal 29 desember 2007 atau 24 HST pada eksplan mawar ulangan ke satu mulai tumbuh tunas. Sedangkan eksplan mawar ulangan ke-2, 3 dan 6 telah terkena kontaminasi sehingga eksplan disinggkirkan dengan tujuan agar eksplan lainnya tidak ikut terkontaminasi. Kontaminasi tersebut ditandai karna adanya jamur yang berwarna kecoklatan, kehijauan, kekuningan, kehitaman dan ada juga jamur yang berwarna putih. Kontaminasi sangat umum terjadi saat kultur jaringan, merupakan gangguan yang tidak dapat dielakkan. Sisa 2 eksplan yang lainnya mengalami stagnasi. Hidup segan, mati tak mau. Keadaannya tetap, tidak ada perubahan dan perkembangannya.
Tunas yang muncul pada 24 HST berwarna hijau muda berbentuk kuncup yang mengintip. Pada hari-hari berikutnya tunas sudah mulai membesar walaupun masih berbentuk kuncup dan belum muncul daun, ini sudah cukup menggembirakan karna sudah mengalami perkembangan. Tapi sayangnya, pada hari tarakhir pengamatan yaitu tanggal 8 januari 2008, botol eksplan menghilang. Sehingga tidak diketahui secara pasti kelanjutan perkembangannya. Eksplan ini tetap dianggap hidup dan dimasukkan dalam perhitungan persentase hidup.
Untuk eksplan yang mengalami kontaminasi, pada hari terakhir jumlahnya bertambah menjadi 4 eksplan. Eksplan ini tentunya dianggap mati dan tidak dimasukan dalam perhitugan persentase hidup. Sisa 1 eksplan yang tetap dalam keadaan stagnan / tetap. Eksplan ini dianggap hidup dan dimasukkan dalam perhitungan persentase hidup. Jadi eksplan yang hidup secara keseluruhan berjumlah 2 dari 6 eksplan yang ditanam. Sehingga prosentase keberhasilan yang didapat dari praktikum kelompok kami adalah 33,3 %. Ini termasuk nilai keberhasilan yang rendah. Dan dilihat dari latar belakang kejadian saat pengamatan serta sama sekali tidak munculnya kalus, daun, apalagi akarnya maka dapat dikatakan percobaan termasuk gagal.
Kegagalan tersebut dimungkinkan karna banyak hal misalnya sterilisasi alat yang kurang optimal / steril; Adanya pengaruh fisik atau biokimia pada eksplan yang kurang bagus (memar, pengupasan, pemotongan, serangan penyakit atau kondisi lain yang tidak normal), bisa juga eksplan telah mengalami gejala alamiah dari proses penuaan tapi tetap dipakai; Sterilisasi eksplan yang mungkin terlalu lama dalam perendaman chlorox sehingga eksplan “terlalu steril” sehingga malah tidak dapat hidup / tumbuh; Saat penanaman praktikan terlalu banyak bicara,tanpa sengaja tangan praktikan keluar dari laminair air flow dan masuk lagi tanpa sterilisasi pada saat penanaman; Mungkin juga karna pemeliharaannya yang tidak cukup baik dalam penjagaan suhu, kelembaban, dan pencahayaannya serta seperti yang tersebut diatas yaitu karna kurang rutinnya penyemprotan spirtus sehingga menimbulkan kontaminasi; Hal lain lagi yang bias menyebabkan kegagalan adalah pada pembuatan media, baik karna komposisi medianya yang kurang optimal atau karna pH media yang kurang tepat.
Penyebab kegagalan itu tidak dapat saya ketahui secara pasti, saya hanya dapat mengira-ngira kemungkinan-kemungkinan penyebab kegagalan seperti yag telah diuraikan diatas. Kesterilan bukan jaminan untuk keberhasilan kultur jaringan. Karna fakta membuktikan walaupun sudah seoptimal mungkin menjaga kesterilan, eksplan tetap terkena kontaminasi dan mati. Sedangkan yang kurang steril, eksplannya malah dapat hidup, tumbuh dan berkembang.
E. Kesimpulan dan Saran
- Kesimpulan
Berdasarkan praktikum acara kultur jaringan tanaman mawar maka dapat diambil beberapa kesimpulan sebagai berikut:
a. Eksplan mawar yang terkontaminasi ada empat yaitu pada ulangan ke-2, ke-3 dan ke-6.
b. Eksplan mawar yang dalam keadaan stagnan ada satu ( dianggap hidup )
c. Jumlah eksplan yang muncul tunasnya terdapat pada ulangan ke-1.
d. Dari enam ulangan eksplan mawar belum muncul daun, akar dan kalus.
e. Persentase keberhasilannya 33.3%.
f. BAP dan Paclobutrazol tidak begitu berpengaruh terhadap pertumbuhan kultur jaringan melati.
- Saran
Mengulangi lagi percobaan ini dan lebih menjaga kesterilan tempat ( laboratorium ) dan diri.
DAFTAR PUSTAKA
Gunawan. 1995. Metode Kultur Jaringan Tanaman. ITB. Bandung.
Marlina, N. 2004. Teknik Modifikasi Media Murashige dan Skoog (MS) untuk Konservasi Invitro Mawar (Rossa spp.). http://www.pustaka_deptan.go.id/publikasi/bt091042.pdf. Diakses pada tanggal 9 Januari 2008 pukul 20.00 WIB.
Rahardja, P.C. 1988. Kultur Jaringan. Penebar Swadaya. Jakarta.
Wilkins. 1989. A Technique For The Controlled Growth of Excised Plant Tissue in Liquid Media Under Aseptic Conditions. Nature. Vol. 163 : 920-921.
Wardiati . 1998. Zat Pengatur Tumbuh. Wirastama. Yogyakarta.
III. KULTUR JARINGAN MELATI
A. Pendahuluan
1. Latar Belakang
Melati merupakan tanaman perdu yang memiliki pesona tersendiri terutama pesona harumnya. Selain untuk tanaman hias, melati banyak diminati industri untuk di ambil ekstraknya. Dalam perdagangan local, melati banyak diminati. Sedangkan dalam perdagangan internasional, melati telah memasuki pasaran eksport walaupun kontinuitasnya belum stabil.Meningkatnya kebutuhan akan melati, membuka peluang agribisnis yang luas.
Kultur invitro atau kultur jaringan merupakan alternative keberhasilan para bisnisman dalam membantu penyediaan bibit yang tahan penyakit dan dapat menyediakan bibit dalam jumlah yang banyak dalam waktu yang relatif singkat. Selain itu, jika yang dibutuhkan adalah ekstraknya yang merupakan hasil metabolisme sekunder maka dapat mengambil alternatife kultur kalus.
Metode kultur invitro merupakan metode yang menguntungkan dan praktis untuk dapat dikembangkan, bertaraf internasional dan memiliki lebih bayak keunggulan.
2. Tujuan
Praktikum acara kultur jaringan tanaman melati memiliki tujuan antara lain:
g. Mengetahui teknik kultur jaringan melati.
h. Mengetahui pengaruh BAP dan Paclobutrazol terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan melati.
3. Waktu dan Tempat Praktikum
Praktikum acara III ini dilaksanakan pada hari Rabu, 5 Desember 2007 pukul 09.00 WIB sampai selesai bertempat di Laboratorium Fisiologi Tanaman dan Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Tinjauan Pustaka
Kultur jaringan adalah suatu metode untuk mengisolasi bagian dari suatu tanaman seperti protoplasma, sel, sekelompok sel, jaringan dan organ serta menumbuhkannya dalam kondisi aseptik sehingga bagian-bagian tersebut dapat memperbanyak diri dan beregenerasi menjadi tanaman utuh kembali (Gunawan, 2005).
Perbanyakan melati dengan kultur jaringan dilakukan di laboratorium, ditumbuhkan secara invitro. Benih yang dihasilkan dalam jumlah besar, dalam waktu yang relatif singkat. Perbanyakan dengan kultur jaringan memerlukan kondisi dan media yang khusus. Perbanyakan didapat dari setiap sel tanaman, menghasilkan individu baru yang sama dengan induknya (Anonim, 2006).
Zat pengatur tumbuh memegang peranan penting dalam pertumbuhan dan perkembangan kultur. Faktor yang perlu mendapatkan perhatian ZPT antara lain jenis zat pengatur tumbuh yang akan digunakan, konsentrasi dan urutan penggunaan ( Mandang, 1993 )
Dalam pertumbuhan jaringan, sitokinin berpengaruh terutama pada pembelahan sel. Bersama – sama dengan auksin memberikan pengaruh interaksi terhadap diferensiasi jaringan. Pada pemberian auksin dengan kadar yang relatif tinggi, differensiasi kalus cenderung kearah pembentukan primordial akar. Sedangkan pada pemberian sitokinin dengan kadar yang relatif tinggi, diferensiasi kalus akan cenderung kea rah pembentukan batang / tunas ( Hendaryono dan Wijayani, 1994 )
Bunga melati mengandung jasmon, sejenis keton yang mudah menguap. Keton ini bersifat menyejukkan dan mampu menurunkan suhu badan saat demam. Minyak bunga melati jenis Jasminus officinale mampu menenangkan urat syaraf jika digunakan untuk mengurut. Untuk penurun demam digunakan segenggam daun muda yang ditumbuk, dicampur dengan setengah genggam bunga melati yang diremas-remas. Campuran ini diletakkan secara merata pada dada anak yang sedang demam (Thomas,1995).
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja
1. Alat
a. LAFC lengkap dengan lampu bunsen
b. Petridish dan botol-botol kultur
c. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau pemes
2. Bahan
a. Eksplan : Mawar
b. Media Kultur
c. Alkohol 96%
d. Aquadest steril
e. Spirtus
f. Chlorox (sunclin)
3. Cara Kerja
a. Mempersiapkan eksplan
b. Mensterilisasi eksplan (dilakukan dalam LAFC)
o Merendam eksplan dalam larutan Dithane M-45 3 mg/l selama ± 12 jam, dilanjutkan dengan chlorox 5, 25% (sunclin 100%) selama ± 3 menit.
o Membilas eksplan dengan aquadest steril.
c. Menanam eksplan
o Membuka plastik penutup botol media kultur.
o Mengambil eksplan dan menanamnya di media kultur dengan pinset. Setelah digunakan, pinset harus selalu dibakar di atas api.
o Selama penanaman, mulut botol harus selalu dekat dengan api untuk menghindari kontaminasi.
d. Memelihara eksplan
o Menempatkan botol-botol media berisi eksplan pada rak-rak kultur.
o Menjaga Suhu, kelembaban dan pencahayaan lingkungan di luar botol.
o Menyemprot botol-botol kultur dengan spirtus setiap 2 hari sekali untuk mencegah kontaminasi.
e. Melakukan pengamatan selama 5 minggu, meliputi:
o Saat muncul akar, tunas, daun dan kalus (HST), diamati setiap hari.
o Jumlah akar, tunas dan daun, diamati 1 minggu sekali.
o Deskripsi kalus (struktur dan warna kalus), dilakukan pada akhir pengamatan.
o Persentase keberhasilan, dilakukan pada akhir pengamatan.
.
D. Hasil dan Pembahasan
1. Analisis Hasil Pengamatan
Perhitugan Persentase Keberhasilan :
Eksplan melati yang masih hidup = 2
Persentase Keberhasilannya =
=33.3 %
2. Pembahasan
Kultur jaringan melati pada acara III ini dilakukan dengan langkah-langkah yang sama dengan kultur jaringan mawar sehingga tidak perlu pan jang lebar lagi dan langsung saja pada hasil pengamatan. Pengamatan pada eksplan melati dari awal pengamatan yaitu pada 1 HST hingga akhir pengamatan yaitu 34 HST selalu stagnan. Eksplan sama skali tidak mau tumbuh, malahan cenderung menuju kematian ( Terkena kontaminasi jamur ).
Dari hari ke hari, semakin banyak eksplan yang terkontaminasi jamur. Diakhir pengamatan, jumlah eksplan yang terkontaminasi ada 4. Dua eksplan lainnya masih saja mengalami stagnasi. Sehingga persentase keberhasilan pada eksplan melati ini adalah 33,3 %. Nilai ini sama dengan nilai prosentase keberhasilan pada eksplan mawar dan saya rasa kultur jaringan pada eksplan melati ini mengalami kegagalan. Jika dilihat dari latar belakang pertumbuhannya,sepertinya masih lebih baik eksplan mawar. Pada eksplan mawar ada yang muncul tunas sedangkan pada eksplan melati sama sekali tidak mengalami pemunculan apapun. Penyebab kegagalan secara pastinya kurang begitu saya katahui.
Seperti pada kuljar eksplan mawar, saya hanya dapat mengemukakan beberapa sebab diantaranya:dimungkinkan karna banyak hal misalnya sterilisasi alat yang kurang optimal / steril; Adanya pengaruh fisik atau biokimia pada eksplan yang kurang bagus (memar, pengupasan, pemotongan, serangan penyakit atau kondisi lain yang tidak normal), bisa juga eksplan telah mengalami gejala alamiah dari proses penuaan tapi tetap dipakai; Sterilisasi eksplan yang mungkin terlalu lama dalam perendaman chlorox sehingga eksplan “terlalu steril” sehingga malah tidak dapat hidup / tumbuh; Saat penanaman praktikan terlalu banyak bicara,tanpa sengaja tangan praktikan keluar dari laminair air flow dan masuk lagi tanpa sterilisasi pada saat penanaman; Mungkin juga karna pemeliharaannya yang tidak cukup baik dalam penjagaan suhu, kelembaban, dan pencahayaannya serta seperti yang tersebut diatas yaitu karna kurang rutinnya penyemprotan spirtus sehingga menimbulkan kontaminasi; Hal lain lagi yang bias menyebabkan kegagalan adalah pada pembuatan media, baik karna komposisi medianya yang kurang optimal atau karna pH media yang kurang tepat.
Dari semua kemungkinan penyebab terjadinya kontaminasi, hal yang menurut saya paling mendasari terjadinya kontaminasi adalah disebabkan oleh kekurang tepatan dalam proses pembutan media, dan mungkin karna perendaman eksplan dalam chlorox yang terlalu lama.
E. Kesimpulan dan Saran
- Kesimpulan
Berdasarkan praktikum acara III ini dapat diambil beberapa kesimpulan sebagai berikut:
· Eksplan melati yang terkontaminasi ada empat.
· Eksplan melati dalam keadaan stagnan ada dua ( dianggap hidup )
· Dari keenam ulangan eksplan melati sama sekali belum muncul daun akar dan kalus.
· Persentase keberhasilannya 33.3%.
· BAP dan Paclobutrazol tidak begitu berpengaruh terhadap pertumbuhan kultur jaringan melati.
- Saran
Mengulangi lagi percobaan ini agar dapat diketahui pengaruh BAP dan paclobutrazol secara tepat pada melati serta lebih menjaga kesterilan tempat dan diri.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2006. Perbanyakan Benih Tanaman Hias Melati. http://distan.jakarta.go.id/today/artikelview.html. Diakses pada Tanggal 14 Desember 2007 pukul 20.10 WIB.
Gunawan, L. W. 2005. Teknik Kultur Jaringan. IPB. Bandung.
Hendaryono dan Wijayani. 1994. Perbanyakan Vegetatif Melalui Kultur Jaringan pada Tanaman Jahe. Jurnal Penelitian Tanaman Industri (4).
Mandang. 1993. Kultur Jaringan. Penebar Swadaya. Jakarta.
Thomas, A.N.S. 1995. Tanaman Obat Tradisional. Yayasan Kanisius.Yogyakarta.
IV. KULTUR JARINGAN ANGGUR
A. Pendahuluan
1. Latar Belakang
Anggur merupakan tanaman buah komersil yang mampu menembus pasaran dunia apalagi local. Perbanyakan tanaman secara besar-besaran dan intensif bukan lagi menjadi rahasia. Namun selama ini perbanyakan tanamannya selalu saja menggunakan cara stek. Padahal cara tersebut memiliki banyak kekurangan,diantaranya adalah penyakit tanaman yang disebabkan oleh virus akan mudah terbawa dan penanamanya yang sangat tergantung pada musim. Dari hal tersebut maka perbanyakan tanaman yang menggunakan cara kultur jaringan atau in vitro menjadi salah satu alternative yang bisa dipertimbangkan.
Kelebihan dari matode kultur jaringan atau in vitro adalah Untuk memperbanyak tanaman tertentu yang sulit atau sangat lambat diperbanyak secara konvensional, perbanyakan tanaman secara kultur jaringan tidak memerlukan tempat yang luas, teknik perbanyakan tanaman secar kultur jaringan dapat dilakukan sepanjang tahun tanpa bergantung pada musim, bibit yang dihasilkan lebih sehat dan memungkinkan dilakukannya manipulasi genetik.
2. Tujuan
Praktikum acara kultur jaringan tanaman anggur memiliki tujuan antara lain:
a. Mengetahui teknik kultur jaringan anggur.
b. Mengetahui pengaruh BAP dan Paklobutrazol terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan anggur.
3. Waktu dan Tempat Praktikum
Praktikum acara IV ini dilaksanakan pada hari Rabu, 5 Desember 2007 pukul 09.00 WIB sampai selesai bertempat di Laboratorium Fisiologi Tanaman dan Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Tinjauan Pustaka
Dasar dari perbanyakan secara in vitro adalah sifat totipotensi sel, yaitu kemampuan suatu sel untuk melaksanakan segala aktivitas hidup, seperti metabolisme, reproduksi dan pertumbuhan. Pada prinsipnya semua jenis sel dapat ditumbuhkan tetapi sebaiknya dipilih bagian tanaman yang muda dan mudah tumbuh, yaitu bagian meristem, misalnya daun muda, ujung batang, ujung akar dan keping biji hal ini dimaksudkan agar deferensiasi sel dapat terjadi lebih mudah dan cepat ( Narayaswami dan Norstog, 1964 )
Kultur jaringan tanaman anggur terdiri dari sejumlah tehnik untuk menumbuhkan organ, jaringan dan sel tanaman. Jaringan dapat dikulturkan pada agar- agar padat atau dalam medium hara cair. Jika ditanamdalam agar, Jaringan akan membentuk kalus, yaitu massa atau sel-sel yang tak tertata, kultur agar juga merupakan teknik untuk meristem dan juga untuk mempelajari organogenesis ( Rismunandar, 1991 )
Manfaat yang dapat dicapai dari pengadaan bibit secara invitro adalah faktor perbanyakannya yang tinggi dalam jangka waktu yang relatif singkat. Untuk itu jumlah tunas merupakan salah satu faktor penting yang menentukan keberhasilan perbanyakan invitro dalam waktu yang cepat. Dari tunas-tunas baru yang terbentuk dapat dipakai sebagai sumber eksplan bagi perbanyakan tunas selanjutnya ( Hendaryono dan Wijayani, 1994 ).
Konsep zat pengatur tumbuh (ZPT) diawali dengan konsep hormon tanaman. Hormon tanaman adalah senyawa-senyawa organik tanaman yang dalam konsentrasi yang amat endah mempengaruhi proses-proses fisiologi. Proses-proses fisiologi ini terutama mengenai proses pertumbuhan, deferensiasi dan perkembangan tanaman (Wattimena, 1991).
Laju pembentukan kalus dari jaringan eksplan yang ditempatkan pada agar hara sangat beragam.Sumber eksplan sering kali menentukan. Bibit steril acap kali menghasilkan jaringan yang paling cocok. Kalus yang baik akan terbentuk dalam waktu 1 bulan. Tekstur kalus dapat beragam, dari yang lembut dan mudah hancur sampai keras dan ulet. Sering kali juga ada keragaman dalam waktu percobaan, dan sebaiknya pada saat memulai, dilakukan sekurang –kurangnya 6 cuplikan dari perlakuan yang sama. Kalus lunak biasanya membentuk kultur suspensi dengan mudah. Jika suatu kultur sel talah beradaptasi untuk tumbuh dalam kultur suspensi cair, pertumbuhan berikutnya dalam agar berlangsung dengan sangat mudah (Husni et all. 1994 )
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja
- Alat
a. LAFC lengkap dengan lampu bunsen
b. Petridish dan botol-botol kultur
c. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau pemes
- Bahan
a. Eksplan : anggur
b. Media Kultur
c. Alkohol 96%
d. Aquadest steril
e. Spirtus
f. Chlorox (sunclin)
- Cara Kerja
a. Mersiapan eksplan
b. Sterilisasi eksplan (dilakukan dalam LAFC)
· Merendam eksplan dalam larutan Dithane M-45 3 mg/l selama ± 12 jam, dilanjutkan dengan chlorox 5, 25% (sunclin 100%) selama ± 3 menit.
· Membilas eksplan dengan aquadest steril.
c. Menanam eksplan
· Membuka plastik penutup botol media kultur.
· Mengambil eksplan dan menanamnya di media kultur dengan pinset. Setelah digunakan, pinset harus selalu dibakar di atas api.
· Selama penanaman, mulut botol harus selalu dekat dengan api untuk menghindari kontaminasi.
d. Pemeliharaan
· Menempatkan botol-botol media berisi eksplan pada rak-rak kultur.
· Menjaga suhu, kelembaban dan pencahayaan lingkungan di luar botol.
· Menyemprot botol-botol kultur dengan spirtus setiap 2 hari sekali untuk mencegah kontaminasi.
e. Melakukan pengamatan selama 5 minggu, meliputi:
· Saat muncul akar, tunas, daun dan kalus (HST), diamati setiap hari.
· Jumlah akar, tunas dan daun, diamati 1 minggu sekali.
· Deskripsi kalus (struktur dan warna kalus), dilakukan pada akhir pengamatan.
· Persentase keberhasilan, dilakukan pada akhir pengamatan.
D. Hasil dan Pembahasan
1. Hasil
Tabel 5.1 Saat Muncul Kalus Tanaman Anggur
| Macam Eksplan | Ulangan | Saat Muncul Tunas |
| Anggur | 1 | 31 HST |
| 2 | _ | |
| 3 | Kontaminasi | |
| 4 | _ | |
| 5 | Kontaminasi | |
| 6 | Kontaminasi |
Sumber: Data Rekap
2. Analisis Hasil Pengamatan
Perhitugan Persentase Keberhasilan :
Eksplan anggur yang masih hidup = 3
Persentase Keberhasilannya = 
= 50 %
3. Pembahasan
Seperti kultur jaringan pada eksplan melati, tehnik perlakuan pada eksplan anngur ini sama saja dengan eksplan mawar maka langsung saja; Dalam praktikum IV kultur jaringan anggur ini data hasil pengamatannya diketahui bahwa pada tanggal 5 januari 2008 atau 31 HST, eksplan anggur muncul kalus. Kalus muncul pada eksplan anggur ulangan pertama. Hanya satu eksplan yang tumbuh muncul kalusnya. Eksplan yang lain masih dalam kondisi stagnan. Sedangkan 3 eksplan yang lain telah disingkirkan karna telah terkontam.
Seperti yang tertuang pada data rekap lampiran, adapun deskripsi dari struktur dan warna kalusnya adalah; Struktur kalus bergelembung – gelembung seperti kumpulan setengah gelembung yang sangat banyak dan kecil-kecil, mengumpul menjadi satu – kesatuan. Warna kalus kuning kehijauan dan hamper seperti kebening – beningan. Semakin lama dan semakin hari jumlah kalus bertambah dan semakin banyak memenuhi area batang / eksplan ( semakin banyak dan meluas ).
Eksplan yang hidup (dalam artian belum terkontam )hingga akhir pengamatan masih saja tetap yaitu 3 eksplan. Terdiri dari 1 eksplan yang telah muncul kalus dan 2 eksplan yang masih dalam keadaan stagnan. Dari hasil tersebut maka prosentase keberhasilan kultur jaringan anggur adalah sebesar 50 %. Nilai keberhasilan ini lebih tinggi dan merupakan prosentase keberhasilan yang tertinggi dari pada prosentase keberhasilan kultur jaringan eksplan lainnya dalam kelompok kami ( kelompok 8 ).
Penyebab dari kontaminasi atau kematian eksplan anggur ini saya rasa kurang lebih sama saja dengan penyebab kontaminasi pada eksplan mawar dan melati. Perkiraan penyebab tersebut diantaranya adalah karna banyak hal misalnya sterilisasi alat yang kurang optimal / steril; Adanya pengaruh fisik atau biokimia pada eksplan yang kurang bagus (memar, pengupasan, pemotongan, serangan penyakit atau kondisi lain yang tidak normal), bisa juga eksplan telah mengalami gejala alamiah dari proses penuaan tapi tetap dipakai; Sterilisasi eksplan yang mungkin terlalu lama dalam perendaman chlorox sehingga eksplan “terlalu steril” sehingga malah tidak dapat hidup / tumbuh; Saat penanaman praktikan terlalu banyak bicara,tanpa sengaja tangan praktikan keluar dari laminair air flow dan masuk lagi tanpa sterilisasi pada saat penanaman; Mungkin juga karna pemeliharaannya yang tidak cukup baik dalam penjagaan suhu, kelembaban, dan pencahayaannya serta karna kurang rutinnya penyemprotan spirtus sehingga menimbulkan kontaminasi; Hal lain lagi yang bisa menyebabkan kegagalan adalah pada pembuatan media, baik karna komposisi medianya yang kurang optimal atau karna pH media yang kurang tepat.
Dari semua kemungkinan penyebab terjadinya kontaminasi, hal yang menurut saya paling mendasari terjadinya kontaminasi adalah disebabkan oleh bahan tanam yang digunakan dalam keadaan tidak normal, media dan suplemen media yang beragam, dan mungkin karna perendaman eksplan yang terlalu lama hingga batang / eksplan berwarna pucat bening kekuningan.
E. Kesimpulan dan Saran
- Kesimpulan
Berdasarkan praktikum acara IV ini dapat diambil beberapa kesimpulan sebagai berikut:
a. Eksplan anggur yang terkontaminasi ada lima yaitu pada ulangan ke-3, ke-5 dan ke-6
b. Dari keenam ulangan eksplan anggur tidak muncul daun, akar, dan tunas.
c. Jumlah ulangan yang muncul kalusnya ada satu pada ulangan ke-1
d. Eksplan anggur yang dalam keadaan konstan ada 2 eksplan yaitu pada ulangan ke-2 dan ke-4.
e. Persentase keberhasilannya 50%.
f. BAP dan paklobutrazol tidak begitu berpengaruh terhadap pertumbuhan kultur jaringan anggur.
- Saran
Mengulangi lagi percobaan ini agar dapat diketahui pengaruh BAP dan Paclobutrazol secara tepat pada Anggur serta lebih menjaga kesterilan tempat dan diri.
DAFTAR PUSTAKA
Hendaryono, D.P.S. dan Wijayani. 1994. Teknik Kultur Jaringan. PT. Kanisius. Yogyakarta.
Husni, A., Ika M. dan Didiek H. Goenardi. 1994. Pengaruh Pemberian Asam Humat terhadap Pertumbuhan Kapolaga secara Invitro. Jurnal Penelitian Tanaman Industri (4).
Narayaswami, S. and K. Norstog. 1964. Plant Embrio Culture. The Botanical Review. No. 4 : 587-627.
Rismunandar. 1984. Liku-liku Tanaman Anggur. Sinar Baru. Bandung.
Wattimena, G.A. 1991. Bioteknologi Tanaman. PAU Bioteknologi Bogor.
V. KULTUR JARINGAN WORTEL
A. Pendahuluan
1. Latar Belakang
Wortel merupakan sayuran yang umum digunakan dalam sehari-hari. Wortel merupakan tanaman umbi semusim yang memiliki kandungan karoten yang tinggi. Selain itu, wortel juga memiliki kandungan gizi tinggi yang sangat penting dan dibutuhkan tubuh terutama kandungan vitamin dan mimeralnya.
Dari segi bisnis, wortel merupakan sayuran komersial yang hingga saat ini masih tetap menjadi andalan para pedagang dan para petani yang menanamnya. Para peani menyukai wortel karena dalam penanamannya tidak terlalu banyak menuntut persyaratan. Tanaman wortel relatif mudah ditangani dan dirawat.
2. Tujuan
Praktikum acara V ini bertujuan untuk:
a. Mengetahui teknik kultur jaringan wortel.
b. Mengetahui pengaruh BAP dan Paclobutrazol terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan wortel.
3. Waktu dan Tempat Praktikum
Praktikum acara V ini dilaksanakan pada hari Rabu, 5 Desember 2007 pukul 09.00 WIB sampai selesai, bertempat di Laboratorium Fisiologi Tanaman dan Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Tinjauan Pustaka
Perbanyakan secara in vitro (kultur jaringan) merupakan suatu perbanyakan dengan mengisolasi suatu bagian tanaman. Seperti protoplas sel, jaringan dan organ serta menumbuhkannya dalam kondisi aseptik, sehingga bagian-bagian tersebut dapat berregenerasi menjadi tanaman lengkap kembali. Teknik perbanyakan in vitro mempunyai peranan yang paling menonjol dalam bidang perbanyakan cepat suatu tanaman., terbukti teknik ini jauh lebih banyak menghasilkan tanaman dibandingkan perbnyakan secara konvensional ( Hendri, G. 1999)
Media tanam harus berisi semua zat yang diperlukan untuk menjamin pertumbuhan eksplan. Bahan-bahan yang diramu berisi campuran garam-garam mineral sumber unsure hara makro dan mikro, gula, protein, vitamin dan hormone tumbuh. Dengan demikian keberhasilan kultur jaringan jelas ditentukan oleh media tanam dan macam tanaman. Campuran media satu mungkin cocok untuk jenis-jenis tanaman tertentu, tetapi tidak cocok untuk jenis-jenis tanaman lainnya ( Steward and Caplin, 1952 ).
Peran fisiologis sitokinin adalah mendorong pembelahan sel, morfogenesis, pertunasan, pembentukan kloroplas, pembentukan umbi,pemecahan dormansi, pembentukan stomata, pembungaan dan pembentukan buah partenokarpi. Sitokinin juga menghambat senescence dan absisi.Pada media pengumbian umbi mikro, Sitokinin mendorong terbentuknya umbi mikro baik pada eksplan tunas in vitro, buku tunggal tunas umbi maupun pada eksplan buku tunggal tunas in vitro. Induksi umbi mikro oleh sitokinin diduga pada pengaruh sitokinin terhadap metabolisme gula ( Went, 1926 )
Sitokinin adalah kelompok senyawa organic yang menyebabkan pembelahan sel yang di kenal dengan proses sitokinesis. BAP / BA ( 6 – Benzil Amino purin / 6 – Benzil Adenin ) merupakan analog sitokinin, pengaruh sitokinin di dalam kultur jaringan tanaman antara lain berhubungan dengan proses pembelahan sel, poliferasi tunas ketiak, penghambatan pertumbuhan akar dan induksi umbi kentang ( Kusumasuasti, 1982 )
Wortel bermanfaat sebagai salah satu obat untuk serangan jantung dan menyempitnya pembuluh darah. Beta karoten yang terkandung dalam wortel terbukti bermanfaat untuk mengurangi resiko kedua jenis penyakit tersebut. Untuk itu beberapa lembaga kesehatan sepeti yayasan kanker menganjurkan kepada masyarakat untuk mengkonsumsi wortel lebih bnyak lagi (Santoso, 1992).
C. Alat, Bahan dan Cara Kerja
- Alat
a. LAFC lengkap dengan lampu bunsen
b. Petridish dan botol-botol kultur
c. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau pemes
- Bahan
a. Eksplan : wortel
b. Media Kultur
c. Alkohol 96%
d. Aquadest steril
e. Spirtus
f. Chlorox (sunclin)
- Cara Kerja
a. Mempersiapkan eksplan
b. Sterilisasi eksplan (dilakukan dalam LAFC)
· Memasukkan eksplan yang sudah dipotong (± 1 cm) ke dalam alcohol dan membakarnya minimal dengan pengulangan sebanyak 2 kali.
c. Penanaman eksplan
· Membuka plastik penutup botol media kultur.
· Mengambil eksplan dan menanamnya di media kultur dengan pinset. Setelah digunakan, pinset harus selalu dibakar di atas api.
· Selama penanaman, mulut botol harus selalu dekat dengan api untuk menghindari kontaminasi.
d. Pemeliharaan
· Menempatkan botol-botol media berisi eksplan pada rak-rak kultur.
· Menjaga suhu, kelembaban dan pencahayaan lingkungan di luar botol.
· Menyemprot botol-botol kultur dengan spirtus setiap 2 hari sekali untuk mencegah kontaminasi.
e. Melakukan Pengamatan selama 5 minggu,meliputi:
· Saat muncul akar, tunas, daun dan kalus (HST), diamati setiap hari.
· Jumlah akar, tunas dan daun, diamati 1 minggu sekali.
· Deskripsi kalus (struktur dan warna kalus) pada akhir pengamatan.
· Persentase keberhasilan, pada akhir pengamatan.
D. Hasil dan Pembahasan
1. Analisis Hasil Pengamatan
Perhitugan Persentase Keberhasilan
Eksplan wortel yang masih hidup = 0
Persentase Keberhasilannya = 
= 0 %
2. Pembahasan
Tehnik perlakuan pada eksplan wortel ini kurang lebih sama dengan eksplan lainnya kecuali pada sterilisasi eksplannya. Adapun tehnik sterilisasinya adalah dengan membakar eksplan menggunakan alcohol diulang sebanyak 2 kali atau lebih.Sterilisasi eksplan wortel ini di lakukan di dalam laminair air flow. Cara sterilisasi ini merupakan teknik sterilisasi eksplan secara fisis yang biasa diberlakukan bagi jaringan yang tebal dan berlapis seperti wortel pada eksplan acara ini.
Pada praktikum terakhir ini, sama sekali tidak mempunyai eksplan yang hidup. Eksplan semuanya mati karna busuk ( mengalami pencoklatan yang mungkin disebabkan adanya memar saat pemotongan ) dan terkena kontaminasi. Tidak sama dengan eksplan lain, eksplan wortel ini terkontaminasinya sangat cepat dan sama sekali tidak ada yang bertahan dalam keadaan stagnan. Bahkan eksplan yang merupakan contoh yang di tanam oleh co-as juga mati. Semua kematiannya terjadi dalam waktu tidak lebih dari 7 HST.
Semua eksplan wortel habis, mati terkontaminasi. Sama dengan kontaminasi eksplan lainnya, kontaminasi ditandai dengan adanya jamur yang berwarna kecoklatan, kehijauan, kekuningan, kehitaman dan ada juga jamur yang berwarna putih. Kontaminasi sangat umum terjadi saat kultur jaringan, merupakan gangguan yang tidak dapat dielakkan.
Berhubung semua eksplan mati atau terkontaminasi maka presentase keberhasilan kultur jaringan wortel ini adalah 0 %. Merupakan nilai prosentase terkecil jika dibandingkan dengan nilai prosentase keberhasilan pada eksplan lainnya.
Ini membuktikan bahwa penanaman kultur jarigan wortel merupakan penanaman yang paling sulit karna mudah terkontaminasi. Diantara penyebab kontaminasi yang terjadi adalah karna banyak hal misalnya sterilisasi alat yang kurang optimal / steril; Adanya pengaruh fisik atau biokimia pada eksplan yang kurang bagus (memar, pengupasan, pemotongan, serangan penyakit atau kondisi lain yang tidak normal), bisa juga eksplan telah mengalami gejala alamiah dari proses penuaan tapi tetap dipakai; Sterilisasi eksplan yang mungkin terlalu lama dalam perendaman chlorox sehingga eksplan “terlalu steril” sehingga malah tidak dapat hidup / tumbuh; Saat penanaman praktikan terlalu banyak bicara,tanpa sengaja tangan praktikan keluar dari laminair air flow dan masuk lagi tanpa sterilisasi pada saat penanaman; Mungkin juga karna pemeliharaannya yang tidak cukup baik dalam penjagaan suhu, kelembaban, dan pencahayaannya serta karna kurang rutinnya penyemprotan spirtus sehingga menimbulkan kontaminasi; Hal lain lagi yang bisa menyebabkan kegagalan adalah pada pembuatan media, baik karna komposisi medianya yang kurang optimal atau karna pH media yang kurang tepat.
Dan menurut saya yang paling rawan sebagai penyebab kontaminasi adalah karna pembakaran pada saat sterilisasi eksplan, pemotongan ekspan yang kurang hati-hati maka melukai jaringan eksplan dan penggunaan komposisi media.
E. Kesimpulan dan Saran
1. Kesimpulan
Berdasarkan praktikum acara V ini dapat diambil beberapa kesimpulan sebagai berikut:
a. Teknik kultur jaringan wortel dapat diketahui dengan menanam eksplan wortel pada media yang telah melalui tahap sterilisasi.
b. Semua ulangan dalam penanaman eksplan mawar mengalami kegagalan atau mati karena akibat terkontaminasi.
c. Pengaruh BAP dan Paclobutrazol belum dapat dilihat pengaruhnya pada penanaman eksplan wortel yang dikarenakan semua eksplan mengalami kontaminasi.
2. Saran
Mengulangi lagi percobaan ini agar dapat diketahui pengaruh BAP dan Paclobutrazol secara tepat pada Anggur serta lebih menjaga kesterilan tempat dan diri.
DAFTAR PUSTAKA
Hendri, G. 1999. Kultur Jaringan. http : / www. Edukasi. Com. 9 Desember 2008.
Kusumasuasti. 1982. Kultur Jaringan dan Pemanfaatannya di Bidang Perkebunan kentang. Menara Perkebunan 50 (2). Hal : 43-47.
.Santoso, H.S. 1992. Wortel Tetap Menguntungkan. Penebar Swadaya. Jakarta
Steward, F.C. and S. M. Caplin. 1952. Investigations on Growth and Metabolism of Plant Cells. Ann. Of Bot. vol. 16 : 491-504.
Went, F.W. 1926. Plant Growth Substance in Agriculture. San Fransisco.
Tidak ada komentar:
Posting Komentar